在做ELIS實驗的過程中,加樣時難免會出現氣泡。通常氣泡都是聚集在酶標板的孔周圍,導致孔中液體不能與孔壁有效接觸,使孔內反應不均一。在做實驗的過程中,有時為了打干凈槍頭里面的液體,很容易產生氣泡,那么氣泡對ELISA實驗結果會有什么影響呢?
1.通常氣泡都是聚集在酶標板的孔周圍,導致孔中液體不能與孔壁有效接觸,使孔內反應不均一。
2.包被時有氣泡的話,將導致包被不完全實際包被量下降--弱陽性甚至假陰性。
3.封閉時有氣泡的話,將導致大量未結合位點的存在,引起非特異性結合--本底增高,假陽性。
4.加樣時有氣泡的話,抗原抗體不能有效的結合--弱陽性甚至假陰性。 5.加二抗時有氣泡的話,抗原抗體不能有效的結合--弱陽性甚至假陰性(競爭法相反----假陽性)。
6.加顯色液時有氣泡的話---顯色不完全。
7.加終止液時有氣泡的話(1、不能完全終止反應 2、影響酶標儀比色,OD值增高)
8.洗滌時有氣泡的話,非特異性結合物不能完全洗去,做無用功。
避免方法:
1、加樣時盡量靠近孔底(不要接觸孔底),用力均勻,不要過快過猛。
2、封閉時一定要加滿孔。
3、洗滌時一定要加滿孔(重要),氣泡會浮上來*終驅除。手工洗板時一定要吸干水分并用力拍干。
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