每一盒
elisa試劑盒里邊都有一份對應的闡明書,而每一份闡明書里都會有寫樣本和稀釋液的稀釋份額,為何樣本都需求稀釋呢?今天的文章中,上海恒遠生物科技有限公司將為您剖析:為何ELISA試驗血清樣本都需求稀釋?
1.競賽按捺對比顯著,應稀釋競賽物;
2.以下降非特異性反響,使特異性的抗原
抗體反響充分體現出來。
血清稀釋用通常的PBS即可,可加1%的BSA,能有用下降ELISA本底,當然假如你嫌費事我覺得用生理鹽水代替PBS也不大。不論你是用直接競賽還是直接競賽,血清的稀釋倍數必定要事前確定,但也不必一點點,你做一個預試驗即可,挑選OD在1.0左右的稀釋倍數,即你的ELISA中陰性孔OD在1.0,這么作出來的曲線對比靈敏。
ELISA試劑盒試驗稀釋血清的步驟:
1、先把蛋白稀釋一定的倍數,比如說10倍、20倍稀釋(這樣可以大體確定一個參數),將抗原進行一系列稀釋包被微量反應板
2、再用一定稀釋度的陽性參考血清和陰性參考血清進行孵育后洗滌,再加酶結合物進行反應,經孵育洗滌后,加底物溶液顯色,終止反應后分別測定O.D值,選擇O.D值≥1.0的那個抗原稀釋度為zui適包被濃度。一般總是要選擇那個O.D值稍大于1.0,而不選擇小于1.0的抗原濃度。陰性參考血清O.D值要求<0.1-0.2。也就是要求陽性參考血清和陰性參考血清的O.D值有明顯差別。
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