Western blot實驗原理
Western免疫印跡(Western blot)是將蛋白質轉移到膜上,然后利用抗體進行檢測的方法。對已知表達蛋白,可用相應抗體作為一抗進行檢測,對新基本的表達產物,可通過融合部分的抗原檢測。
與Soutern或Northern雜交方式類似,但Western blot采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳,被檢測物是蛋白質,“探針”是抗體,“顯色”用標記的二抗。
經過PAGE分離的蛋白質樣品,轉移到固相載體(例如硝酸纖維素薄膜)上,固相載體以非共價鍵形式吸附蛋白質,且能保持電泳分離的多肽類型及其生物學活性不變。
樣本運輸條件及保存條件:
組織樣本
1.組織樣本應立即放置-20℃。
2.運輸過程采用液氮,干冰,市內運輸可選用冰袋。
3.樣本量不低于100 mg。
4.請告知組織種屬和類型,如肝臟、脾臟等。
細胞樣本
1.有嚴格時間節點的實驗需客戶自行裂解樣本,提取蛋白,采用干冰運輸。
2.客戶離心收集好的細胞、懸浮細胞、貼壁細胞都需用冰袋維持4℃運輸,不可使用干冰和液氮。
3.所提供細胞量不低于106。
特殊樣本
1.全血采用冰袋維持4℃運輸,嚴禁用干冰和液氮運輸,血清和血漿可采用液氮,干冰,冰袋運輸。
2.植物組織應采用干冰或液氮運輸,防止植物褐化,氧化。
3.客戶處理好已經變性的樣本,液氮,干冰,冰袋均可運輸。
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