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ELISA研究視角來看實驗重點內容

閱讀次數:1000   發布時間:2014/9/23 8:42:02

     在操作實驗的時候,不少新手會忽略了實驗的主要原理這一問題。ELISA法具有靈敏、特異、簡單、快速、穩定及易于自動化操作等特點,今天上海恒遠帶您從ELISA研究視角來看實驗重點內容,ELISA實驗新手可要注意嘍! 

    對于一些小分子的檢測,比如前列腺素、糖皮質激素的檢測,可以選擇用競爭法ELISA去檢測,也要購買采用這個方法的盒子。一般細胞因子的檢測,都是采用常規的夾心法ELISA檢測,因為因子分子量比較大,一般10幾個KD左右,很容易找到兩個或者多個抗原表位。而小分子很難找到兩個不同的表位,也就決定了包被抗體和檢測抗體無法同時結合小分子并固相化。解決方案就是酶標板上包被二抗,每個孔加入一定量的酶標的小分子,然后加樣品,再加不帶標記的檢測抗體,顯色底物。樣品的目的小分子的含量越高,吸光度越低。
·ELISA研究之浸泡式洗滌:
  1. 吸干或甩干孔內反應液;
  2. 用洗滌液過洗一遍(將洗滌液注滿板孔后,即甩去);
  3. 浸泡,即將洗滌液注滿板孔,放置1-2分鐘,間歇搖動,浸泡時間不可隨意縮短;
  4. 吸干孔內液體。吸干應徹底,可用水泵或真空泵抽吸,也可甩去液體后在清潔毛巾或吸水紙上拍干;
  5. 重復操作c和d,洗滌3-4次(或按說明規定)。在間接法中如本底較高,可增加洗滌次數或延長浸泡時間。
    微量滴定板多采用浸泡式洗滌法。洗滌液多為含非離子型洗滌劑的中性緩沖液。聚苯乙烯載體與蛋白質的結合是疏水性的,非離子型洗滌劑既含疏水基團,也含親水基團,其疏水基團與蛋白質的疏水基團借疏水鍵結合,從而削弱蛋白質與固相載體的結合,并借助于親水基團和水分子的結合作用,使蛋白質回復到水溶液狀態,從而脫離固相載體。洗滌液中的非離子型洗滌劑一般是吐溫 20,其濃度可在0.05%-0.2%之間,高于0.2%時,可使包被在固相上的抗原或抗體解吸附而減低試驗的靈敏度。
    ELISA研究也是要靠經驗總結的,做的多了自然就熟練了。了解更多的相關資料內容您可以在本網站中留言,也可以給我司業務員來電。

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