又是一個周五,時光飛逝,還記得上個星期的這個時候,我們為朋友們分享的是一個用TRIzol索取RNA的方法步驟。今天我們要給朋友們說的也是一個實驗過程,其相關于酶的細胞。下面我們就來看一看上海恒遠分享整理:酶的細胞化學實驗技術過程。
在一定條件下,使組織細胞內的酶與其底物相互作用,形成初級反應產物,再用捕捉劑在酶的作用部位進行捕捉,使其在顯微鏡下可見。
反應的過程如圖下所示:
我們通過圖中式可見,酶細胞化學反應實際上由兩項反應組成。前面的酶反應相當于細胞內自然條件下發生的酶促反應,后面的捕捉反應則是為了使酶反應可見而 人為造成的。捕捉反應的目的是使酶反應產物形成在顯微鏡下可見的*終反應產物,即*終反應產物在光鏡下具有鮮明顏色,在電鏡下具有高電子密度。捕捉反應主要 有金屬鹽沉淀法、色素形成和嗜鋨物質生成法。
在實驗中我們要準備好樣品的制備:
酶細胞化學的一個重要問題是既要保存好細胞內酶的活性,又要保存好細胞的結構,因此選擇適當的固定劑種類、濃度、固定的方式和時間是細胞化學技 術的一個關鍵問題。光鏡樣品固定多選用中性福爾馬林或多聚甲醛,4℃、24小時,常規的石蠟包埋切片可以滿足相當一部分酶的細胞化學要求;電鏡樣品固定通 常用0.5~2%戊二醛或4%多聚甲醛,4℃、2小時,再切成5~100μm的厚片用于細胞化學反應,反應后經常規的鋨酸后固定,脫水、包埋、超薄切片、 至電鏡下觀察。冷凍切片能較大限度地保存酶的活性,因此是光、電鏡酶細胞化學技術中常用的方法。
酶細胞化學反應實際上就是孵育反應的過程,孵育液的成分主要有酶的底物、捕捉劑,保證孵育液pH 的緩沖液以及有關的添加劑等。孵育的溫度和時間可根據不同的酶和組織通過實驗而確定。電鏡酶細胞化學的樣品在孵育反應后需經鋨酸后固定、梯度乙醇脫水、環 氧樹脂包埋和超薄切片,至電鏡下觀察。
基本實驗過程式:
酶的細胞化學實驗技術過程到這里就結束了,您在實驗的過程中也要注意一些細節問題。這里是上海恒遠生物,我公司的產品質量可靠,進口、過程,專業代理。您在實驗我公司產品的同時,有任何問題都可以來電咨詢我公司業務員,我們會時間為您解決,不論是產品還是實驗技術。